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Biorab植物RNA快速提取试剂盒II适用于大多数植物RNA提取，可以简单快速地从各种来源的植物组织中纯化高质量的总RNA。纯化好的总RNA可用于mRNA分离，RT-PCR，Northern杂交等下游分子实验。
操作步骤：(样品裂解，样品纯化，RNA收集)
离心条件均优先选择4℃，室温离心也可以。
一：样品裂解
1.液氮研磨法
取1mL裂解液CZ加入1.5mL离心管中。将100mg植物组织用液氮研磨成粉末，将其转移到含有裂解液CZ的离心管中，立即剧烈振荡20秒后用枪头吹打混匀或涡旋震荡使样本充分裂解。
2.匀浆法
先将植物组织剪切成小块，放入10～15mL塑料离心管中，加入1mL裂解液CZ。然后用匀浆器匀浆5～20秒，确定大部分样品破碎后，将裂解液转移至1.5mL离心管中。
二：样品纯化
1.将裂解物12000rpm离心2～3min，吸取上清(如样品水分较多，上清也最多取1mL)到1.5mL离心管。
2.在上清中加入500μL无水乙醇，颠倒混匀，分两次加入同一个RNA纯化柱中(如有絮状物或沉淀产生，一并加入纯化柱中)。12000rpm离心1min，弃穿透液。
3.在纯化柱中加入0.5mL RNA洗涤液，室温12000rpm离心半分钟，弃穿透液。重复洗涤一次。此步会洗去色素等杂质。(洗涤液使用后拧紧瓶盖，防止乙醇挥发)
4.裂解液经过特殊处理，可以去除大部分基因组污染。
下图为未用DNase I消化的植物RNA提取结果。
如需彻底去除DNA污染，参照步骤(四)可选步骤，用DNase I处理。
三：RNA收集
1.将结合有RNA的纯化柱12000rpm离心1min，甩干乙醇。(乙醇的残留将会降低洗脱效果和影响下游实验，或者适当延长离心时间，将有助于乙醇的去除)
2.弃收集管，将柱芯转移到1.5mL的RNase-free离心管中，加入30～50μL DNase＆RNase-free水，室温放置1分钟，12000rpm离心1分钟洗脱RNA。得到的RNA可直接用于后续实验或者-80℃存放。
3.如果要提高RNA产量，加入30～50μL DNase＆RNase-free水重复洗脱一次，合并两次穿透液；如果要提高RNA浓度，使用第一次的洗脱液加回到纯化柱中重复洗脱。
注意：建议RNA用于下游实验之前，先进行质量检测。经变性琼脂糖凝胶电泳后，会有清晰的28S和18S条带，以及中间弥散的mRNA条带，其中28S条带是18S条带亮度的1.5～2倍。有时还包括跑在最前面的较暗的5S条带。A260/A280比值1.8~2.0对应RNA纯度90～100%之间。
四.DNA清除(可选步骤)
1.接样品纯化步骤(二，3)。
DNase I工作液配置：取RNase-free离心管，加入DNase I反应液48μL，DNase I溶液2μL。吹打混匀。(DNase I置于-20℃保存)
2.将DNase工作液在37℃预热1分钟，然后全部加入到RNA纯化柱中，室温放置2分钟。
注意：2分钟一般足够降解大多数情况下的DNA污染。如果DNA没有彻底降解(可能由于样品中残留的杂质抑制了DNase的活性)，此步骤可以延长到5分钟或10分钟。
3.直接在纯化柱中加入0.7mL RNA洗涤液，室温离心半分钟，弃穿透液。
4.接RNA收集步骤(三)。
五.优化方案
1.如样品在裂解后离心有不溶物难以沉淀，会影响纯化柱回收效率，建议在上清中加入200μL氯仿，震荡混匀后12000rpm离心3min后再取上清液，加乙醇上柱。
相关搜索：植物RNA快速提取试剂盒，Plant RNA Rapid Extract Kit